苦丁茶叶中总黄酮的含量测定

发布时间：2011-07-06 来源：老农茶网

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摘　要　为了测定苦丁茶叶中总黄酮的含量，利用黄酮类化合物与金属离子形成的螯合物在510nm处有最大吸收度，用分光光度法进行测定。效果满意，方法简便可靠。
　　关键词　分光光度法　苦丁茶叶　黄酮
　　中图分类号　R284.1

Determination of Total Flavone Content in Ilicis Folium Leaf

Zhang Yizhen
（Guangxi College of TCM Nanning 530001）
Li Jianming
（Guangxi Pharm aceutical school 530023）

　　Abstract　Spectrophotometry was used to determine the total fla vone co ntent in Ilicis Folium leaf according to the fact that the maximum absorbency ca n be obtained when the chelate formed by the combination of flavonoids and metal ion is at 510 nm. The result has shown that the method for determination of the total flavone content in Ilicis Folium leaf is easy to handle and reliable with satisfactory result.
　　Key words　Spectrphotometry　Ilicis Folium leaf　flavone

　　苦丁茶主要为冬青科植物枸骨(IlexCornutaLindl)和大叶冬青(IlexlatifilonThunb)的叶^〔1〕。分布华东及广西等地。具散风热、清头目、治头痛等功用，常为日常饮茶之用。其所含主要化学成分为鞣质、皂甙、黄酮类^〔2〕等成分。本文以芦丁为对照品，用分光光度法测定其含量，效果满意，方法简便可靠。

1　原理

　　黄酮类化合物与金属离子能形成稳定的呈色螯合物；于510nm处有最大吸收，可用分光光度法进行测定^〔3〕。

2　仪器及试剂

　　采用721A型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供)；5%的亚硝酸钠及5%硝酸铝试液；4%氢氧化钠试液；其余实验所用试剂均为分析纯。

3　总黄酮的含量测定

3.1　测定波长的选择
　　取样品液适量，在0.3ml5%亚硝酸钠存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比，于420～700nm范围内测定螯合物的吸收度；吸收曲线图略。螯合物于510nm处有最大的吸收。故测定时选用此波长。
3.2　　标准曲线的绘制
　　分别精密吸取芦丁对照液(0.1mg/ml)0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至5.00ml，分别加入5%亚硝酸钠试液0.3ml，摇匀，静置6min，再加5%硝酸铝试液0.3ml，摇匀，静置6min，再加4%氢氧化钠试液4.00ml，用60%乙醇释释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂作空白，于510nm处测吸收度，得回归方程：Y=0.8734X-0.0151，r=0.9999。
3.3　样品总黄酮的含量测定
　　精密称取苦丁茶粉末(40目)约3g，加40ml95%乙醇，先泡0.5h，回流提取2h，抽滤，再加40ml95%乙醇回流提取1.5h，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇至仅剩5～7ml为止，放100ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。精密吸取样品液1.00ml，置10ml容量瓶中，余下按3.2项下操作，测得吸收度，结果如表1。

表1　样品总黄酮的含量测定结果

编号	样品量(g)	吸收度	样品总黄酮(%)	均值(%)	RSD(%)
1—1	2.9273	0.599	2.40
1—2	2.9897	0.612	2.41	2.40	0.42
1—3	3.1305	0.635	2.38
2—1	3.0464	0.653	2.51
2—2	3.0350	0.645	2.49	2.50	0.40
2—3	3.0425	0.648	2.49

3.4　样品加样回收试验
　　为验证提取方法的可靠性，采用了将同一批的苦丁茶叶粉末(40目)称取8份，每2份作一组，一份加入已知量的芦丁对照品，在与测定方法相同条件下，进行提取和测量，结果如表2。

表2　样品加样回收试验结果

组别	样品含量 (mg)	加入量 (mg)	测得量 (mg)	回收率 (%)
1	71.56	5.80	77.41	100.06
2	72.05	4.00	76.15	100.13
3	74.53	3.60	78.09	99.95
4	74.32	4.70	79.01	99.99

平均回收率(%)=100.04
RSD=0.06(%)

4　讨论
4.1　为使黄酮提取完全，回流提取后的过滤宜用抽滤，把药渣抽干。但过滤杂质沉淀时，不宜用抽滤。
4.2　经实验证明，乙醇提取液浓缩后加等量水能有效地使杂质沉淀排除干扰。
4.3　样品含量测定结果中，第一批样品的总黄酮含量低于第二批样品，说明苦丁茶叶中总黄酮含量与采收地点、时间等因素有关。