不同茶类抗烟毒诱发细胞微核率的效果

Effects of different tea on decreasing cellular micronuclei frequency induced by cigarette

Sun Yun
(Department of Horticulture, Fujian Agricultural University, Fuzhou 350002)
Guo Chunfang
(Department of Biology, Fujian Educational College, Fuzhou 350001)

　　Abstract　Different tea was added to water-soluble substance containing cigarette smoke and the effects were analysed by testing cellular micronuclei of root-tip cells of Vicia faba．The results showed that the cellular micronuclei frequency decreased significantly．Green tea and Oolong tea were more effective than white tea and black tea, but there was less difference between green tea and Oolong tea, so as white tea and black tea．At the same time, the tea-liquid/water ratio of 1/50 was also more effective than that of 1/100．The effects were positively correlated with catechins．It could be deduced that drinking tea could control the harm from cigarette smoke.
　　Key words　tea; water-soluble substance contained in cigarette smoke; micronuclei frequency; catechins

　　微核(micronucleus)是真核类细胞中的一种异常结构,它通常是由各种理化因子对分裂细胞作用而产生的.微核高峰出现在畸变高峰之后，染色体的畸变是导致微核形成的重要因素.由于微核形成和染色体畸变的一致性，微核检测法广泛应用于评定理化因子诱变活力及环境监测等研究领域.特别是蚕豆根尖细胞微核检测技术，试验周期短，方法简便、经济，应用领域更加广泛.
　　微核检测除用于化学诱变剂诱变活力的检测外，还用于评价抗诱变物的抗诱变效果.洪振丰等(1990）研究乌龙茶对NaF和As₂O₃诱发细胞微核的影响，结果表明5％乌龙茶具抗F、As诱发的细胞遗传损伤的作用.嵇庆等(1995a,1995b）研究V_E、V_C、亚硒酸钠、烟酰胺及绿茶浸出物对香烟烟雾水溶物抗诱变的效果，提出这些物质可能具有减轻吸烟引起的遗传毒性损伤作用.茶叶做为保健饮料为世人所瞩目，茶叶提取液具消除烟碱作用，可降解人体内尼古丁和烟焦油（陈天霓等,1993;王云,1990;周庆惠,1990）.本文运用蚕豆根尖细胞微核检测技术，研究比较绿茶、乌龙茶、白茶和红茶抗香烟烟雾水溶物诱变作用的效果，及其与茶叶中主要物质含量变化的关系.

1　材料与方法
1.1　材料
　　1997年春季教学茶样（福建农业大学茶学教研室）：绿茶为烘青，乌龙茶为黄旦，白茶为白牡丹，红茶为工夫红茶.富健牌过滤嘴香烟（福建龙岩卷烟厂），烟丝重(737.0±6.6) mg^.支^-1.蚕豆(Vicia faba)为白皮蚕豆（福州市售）.
1.2　方法
1.2.1　香烟烟雾水溶物的制备　参照嵇庆等(1995b)的方法.取带三通的密闭三角瓶1只，将香烟过滤嘴插入一端并点燃，另一端接注射器，缓慢抽吸.待烟雾抽满注射器内后，用左手捏住过滤嘴端的胶管，右手用力推动注射器，使烟雾缓慢通过三角瓶中的蒸馏水，轻摇三角瓶反复抽吸，直至香烟燃烧完毕.
　　为取得含量一致的香烟烟雾水溶物，试验采用集中制备方法，使250 mL蒸馏水中含2支香烟烟雾水溶物.
1.2.2　蚕豆根尖制备　洗净蚕豆种子，置28 ℃培养箱内用蒸馏水浸种催芽，24 h后置于铺有湿纱布的托盘内，在28 ℃下培养3 d，待根长至2～3 cm时备用.
1.2.3　染毒、修复　选发育良好、根长一致的蚕豆幼苗插入有孔的培养板中，置于各试验处理溶液（将烟雾水溶液加热至沸，添加各茶类，水浴15 min后冷却用于试验）中，使根尖完全浸入，28 ℃下培养6 h后用蒸馏水清洗根尖2次，再换入新鲜蒸馏水修复培养22 h.
1.2.4　固定保存　切取处理好的根尖，用新配的卡诺氏固定液（无水乙醇∶冰乙酸＝3∶1）固定24 h后转入体积分数为0.70酒精，置于4 ℃冰箱保存备检.
1.2.5　染色与观察统计　取固定好的根尖，用1 mol^.L^-1 HCl在60 ℃下水解15 min，后经Schiff试剂染色，制片镜检，每组至少观察5个根尖，每个根尖至少计数1000个细胞，计算蚕豆根尖细胞微核千分率，并进行统计分析.
1.2.6　内含物测定　茶多酚含量由酒石酸亚铁分光光度法测定，儿茶素含量由香荚兰素比色法测定.

2　结果与分析
2.1　不同茶类对香烟烟雾水溶物诱变作用的影响
　　蚕豆根尖细胞微核率检测的结果表明,在香烟烟雾水溶液中添加不同茶类之后，其细胞微核率比对照明显下降(表1).t检验t_0,1～t_0,8表明,处理1至处理8微核率下降均达极显著水平(表2)，说明各种茶叶均有明显抗烟毒效果.

表1　试验处理及细胞微核率统计¹⁾
　Table 1　Treatment and cellular micronuclei frequency

¹⁾各处理用烟量均为每250 mL蒸馏水中含2支香烟烟雾水溶物.

表2　各处理之间微核率的t检验¹⁾
Table 2　t-test of micronuclei frequency in every treatment